La ligasa de ADN T4 Thermo Scientific cataliza la formación de una unión fosfodiéster entre los extremos yuxtapuestos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo en ADN o ARN bicatenarios. La enzima repara muescas monocatenarias en ADN bicatenario, ARN o híbridos de ADN/ARN. También une fragmentos de ADN con extremos cohesivos o romos, pero actúa en ácidos nucleicos monocatenarios.

La ligasa de ADN T4 requiere ATP como cofactor.

Características destacadas

• Activa en tampones de RT, PCR y enzimas de restricción Thermo Scientific (cuando se complementa con ATP)
• Rápido: la ligadura de extremos viscosos se realiza en 10 minutos a temperatura ambiente
• Se suministra con solución PEG eficaz para la ligadura de extremos romos

Aplicaciones

• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Clonación de productos de PCR
• Unión de adaptadores o enlaces oligonucleótidos bicatenarios a ADN
• Mutagénesis dirigida
• Polimorfismo en la longitud de fragmentos amplificados (AFLP)
• Detección de ARN mediado por ligasa (consulte la referencia 3)
• Reparación de muescas en ADN bicatenario, ARN o híbridos de ADN/ARN
• Circularización automática de ADN lineal.

Incluye

• Ligasa de ADN T4
• Tampón de ligasa de ADN T4 10X
• Solución PEG al 50 %

Notas

• La unión de T4 DNA Ligase al ADN puede provocar un desplazamiento de bandas de geles de agarosa. Para evitarlo, incube las muestras con colorante de carga de ADN 6X y solución SDS a 70 °C durante 5 min o a 65 °C durante 10 minutos y enfríelas con hielo antes de la electroforesis.
• Durante el proceso de transformación, el volumen de la mezcla para la reacción de ligación no debe exceder el 10 % del volumen adecuado de las células competentes.
• Antes de la electrotransformación, elimine la ligasa de ADN T4 de la mezcla de ligadura mediante columnas de centrifugación o una extracción con cloroformo. El ADN extraído puede precipitarse posteriormente con etanol.